Instrumentos de Reação para Síntese de Fase Sólida de Peptídeos

O que é peptídeo?

O polipeptídeo é uma substância biologicamente ativa que está relacionada a diversas funções celulares no organismo. Sua estrutura molecular está entre aminoácidos e proteínas. É um composto formado por uma variedade de aminoácidos combinados por ligações peptídicas em uma determinada ordem. Polipeptídeo é um termo geral para substâncias biologicamente ativas que envolvem várias funções celulares em organismos e é frequentemente usado em análise funcional, pesquisa de anticorpos, especialmente desenvolvimento de drogas e outros campos.

Princípios Básicos da Síntese de Fase Sólida de Peptídeos

Primeiro, o grupo hidroxi do aminoácido hidroxi-terminal da cadeia peptídica a ser sintetizada é conectado a uma resina polimérica insolúvel em uma estrutura de ligação covalente, e então o aminoácido ligado ao carreador de fase sólida é usado como componente amino para remova o grupo protetor amino e conecte-se com o mesmo. A porção carboxila ativada em excesso reage para alongar a cadeia peptídica. Repita a operação (condensação→lavagem→desproteção→neutralização e lavagem→a próxima rodada de condensação) para atingir o comprimento da cadeia peptídica a ser sintetizada. Finalmente, a cadeia peptídica é clivada da resina e purificada para obter o polipeptídeo desejado. O grupo α-amino protegido por BOC (terc-butoxicarbonil) é denominado método de síntese em fase sólida BOC, e o grupo α-amino protegido com FMOC (9-fluorenemetoxicarbonil) é denominado método de síntese em fase sólida FMOC.

Processo de Síntese de Polipeptídeos

A: Seleção de resina e imobilização de aminoácidos

Existem três tipos principais de carreadores de polímeros usados para a síntese de polipeptídeos: poliestireno reticulado, poliamida e resinas lipídicas de polietilenoglicol. A imobilização dos aminoácidos é conseguida principalmente pela formação de ligações covalentes entre os grupos carboxila dos aminoácidos protegidos e os grupos reativos da resina.

B: Proteção e remoção do grupo amino, grupo carboxila e cadeia lateral

Para sintetizar com sucesso um polipeptídeo com uma sequência de aminoácidos específica, é necessário proteger os grupos amino e carboxila que não estão envolvidos na formação de ligações amida e, ao mesmo tempo, proteger o grupo ativo na cadeia lateral de aminoácidos e remover o grupo protetor após a reação estar completa. Nos últimos anos, o método de síntese FMOC tem sido amplamente utilizado. Os grupos carboxila são geralmente protegidos pela formação de grupos éster. Ésteres metílicos e etílicos são métodos comuns para proteger grupos carboxílicos em sínteses por etapas.

C: Reação de formação de peptídeo

A reação de formação de peptídeo na fase sólida é geralmente colocar dois aminoácidos correspondentes protegidos por amino e protegidos por carboxil em solução sem formar uma ligação peptídica. Para formar uma ligação amida, o método comumente usado é ativar o grupo carboxila para se tornar A ligação amida é formada pela mistura de anidridos ácidos, ésteres ativos, cloretos ácidos ou formando anidridos ácidos simétricos com um agente de condensação forte (como carbodiimida).

D: Clivagem e purificação de cadeias peptídicas sintéticas

O método BOC usa TFA+HF para clivar e remover o grupo protetor da cadeia lateral, e o método FMOC usa TFA diretamente. A purificação adicional, separação e purificação de cadeias peptídicas sintéticas são geralmente realizadas por cromatografia líquida, cromatografia de afinidade, eletroforese capilar e semelhantes.

Quais são os instrumentos de reação para a síntese de peptídeos em fase sólida?

O processo de síntese de peptídeos em fase sólida é muito complicado e requer monitoramento intuitivo por parte dos operadores. Ao mesmo tempo, o corte online pode ser realizado após a síntese (o reagente de corte TFA é extremamente corrosivo). Esses requisitos limitam o material do reator. O reator de vidro é usado por muitos especialistas em química e biologia devido às suas características completamente transparentes e resistentes à corrosão.

Com o desenvolvimento da tecnologia de síntese de peptídeo em fase sólida e a melhoria da resistência à corrosão de materiais de aço inoxidável, o reator de aço inoxidável 316 também foi gradualmente usado no principal reator de laboratório e possui melhor condutividade térmica do que o vidro, evitando as características frágeis do vidro .

Quanto à operação real, como escolher entre vidro e aço inoxidável depende de diferentes propósitos de teste ou necessidades de produção.